4.5.1概述

孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、嚴(yán)基塊綠、孔雀綠。它既是殺真菌劑，又是染料，易溶于水，溶液呈藍(lán)綠色。研究結(jié)果表明，孔雀石綠具有高毒素、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用。鑒于孔雀石綠的危害性，我國將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》。

以往，孔雀石綠殘留量測(cè)定采用液相色譜法，操作復(fù)雜，需要專業(yè)實(shí)驗(yàn)人員，儀器工作環(huán)境要求高，不能滿足現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)需求。與此相比，孔雀石綠定性快速檢測(cè)試劑盒法的檢測(cè)步驟較簡(jiǎn)單，技術(shù)條件要求低，大大縮短了測(cè)定時(shí)間，同時(shí)也降低了檢測(cè)成本。

4.5.2水產(chǎn)品孔雀石綠、結(jié)晶紫的速測(cè)技術(shù)—速測(cè)盒法

1.速測(cè)原理

水產(chǎn)品中的孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝產(chǎn)物無色孔雀石綠、無色結(jié)晶紫經(jīng)過前處理后，樣液經(jīng)過孔雀石綠SPE小柱富集形成有色環(huán)帶，可初步判斷樣品中是否含有有色孔雀石綠、結(jié)晶紫。用洗脫劑將柱上待檢物洗脫下來，經(jīng)柱衍生化后，加萃取劑，若萃取劑有明顯的綠色或紫色說明樣品中含有待檢物質(zhì)。將萃取劑取出滴于白色點(diǎn)滴板上，可在板上形成綠色或紫色環(huán)斑，從而可準(zhǔn)確定性樣品中是否含有孔雀石綠或結(jié)晶紫。

2．速測(cè)范圍

本法用于檢測(cè)魚類、蝦類等孔雀石綠、結(jié)晶紫、無色孔雀石綠、無色結(jié)晶紫成分，適用于市場(chǎng)監(jiān)督部門、水產(chǎn)監(jiān)督部門對(duì)水產(chǎn)品的現(xiàn)場(chǎng)及化驗(yàn)室檢測(cè)監(jiān)控。

本方法使用的試材由北京中衛(wèi)食品科技公司、廣州天河綠洲生化研究中心提供。

3．方法特點(diǎn)

(1)可現(xiàn)場(chǎng)操作，用于快速篩選法。

(2)檢測(cè)速度快，檢測(cè)一個(gè)樣品30min左右，可多殘留分析。

(3)不需其他試劑，檢測(cè)成本低。

(4)不需做對(duì)照實(shí)驗(yàn)，特異性高，可準(zhǔn)確定性，檢測(cè)下限1.0ug/kg。

4．速測(cè)步驟與結(jié)果判定(實(shí)驗(yàn)室快速按照A，現(xiàn)場(chǎng)快速按照B)

(1) A取水產(chǎn)品可食部分用絞肉機(jī)絞碎后，準(zhǔn)確稱取10.0g于100mL離心管中，加入提取劑1、提取劑2各一瓶，振搖5min后，4000rpm離心5min，取上清液10mL于100mL量筒中，用蒸餾水定容至30mL。

B用剪刀剪取約10g樣品于研缽中，加入一瓶提取劑2研碎后，再加入一瓶提取劑1繼續(xù)研磨約3～5min，用濾紙過濾后擠干殘?jiān)?，收集濾液10mL于100mL量筒中，用蒸餾水定容至30mL。

(2)層析柱激活。層析柱在使用前依次加入2mL洗脫劑、5mL蒸餾水，吸耳球上加壓，廢液舍棄。

(3)過層析柱。將50mL注射器與層析柱連接，將步驟(1)中收集到的樣液倒入注射筒里，用注射塞加壓，加快流速，建議30mL樣本通過柱子的時(shí)間為5～8min，待樣液*流干，棄去流出液，然后依次加2mL洗滌劑及2mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄。

(4)結(jié)果初判。觀察層析柱中吸附劑顏色變化，若吸附劑逐漸形成綠色環(huán)帶，可初步判斷樣本中含有孔雀石綠；若吸附劑逐漸形成紫色環(huán)帶，可初步判斷樣本中含有結(jié)晶紫；加0.8mL洗脫液于層析柱中，吸耳球上加壓，用離心管1收集流出液，根據(jù)液體顏色來判斷。

(5)衍生化。依次加2mL洗脫液及2mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄，將一瓶衍生化試劑倒入層析柱中，加入2mL蒸餾水用吸耳球從上口加壓擠干；棄去流出液，將步驟(4)中離心管1的洗脫液加入柱中，吸耳球上加壓，用離心管2收集流出液，再用0.8mL洗脫液于層析柱中，吸耳球上加壓，用此離心管2收集混勻。

(6)萃取。取步驟(5)中的離心管2，加入0.5mL蒸餾水后，再加入0.5mL萃取劑，扣上管塞混勻靜置，離心管2下層若有明顯的綠色或紫色則可判斷樣品中含有孔雀石綠或結(jié)晶紫，若無明顯的綠色或紫色需進(jìn)一步的判斷。

(7)檢測(cè)。用1mL注射器取步驟(6)中離心管2中的下層萃取液(注意不要吸到上層的液體)，加到白色點(diǎn)滴板的一個(gè)孔上，樣液漸漸揮干，若在孔上形成綠色斑環(huán)說明樣品中含有孔雀石綠，形成紫色斑環(huán)樣品中含有結(jié)晶紫。

文章來源：《食品安全快速檢測(cè)技術(shù)》

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